O guia essencial para os tubos centrifugantes: tempo, técnicas e práticas recomendadas "

A centrifugação é uma técnica de laboratório essencial usada em uma ampla variedade de disciplinas, como diagnóstico clínico, pesquisa e biotecnologia. O processo envolve amostras de giro em altas velocidades para separar componentes com base em suas densidades. Os tubos devem ser centrifugados no momento certo e sob condições específicas para garantir resultados precisos. Aqui está um mergulho profundo no assunto para ajudá -lo a entender quando, por quê e como os tubos de centrifugação de maneira eficaz.

1. O que é centrifugação?

A centrifugação é o processo de aplicação da força centrífuga a uma amostra para separar seus componentes. A força faz com que os componentes mais densos se movam para fora, enquanto os componentes mais leves permanecem mais próximos do centro. As aplicações mais comuns envolvem separar líquidos e sólidos, como plasma do sangue ou separar células dos meios de cultura em ambientes de pesquisa.

2. Quando Tubos de centrífuga ?

A centrifugação não é algo que deve ser feito em momentos arbitrários. Ele precisa ocorrer sob certas circunstâncias ou tipos específicos de preparação para garantir a integridade da amostra. Abaixo estão os cenários comuns quando os tubos devem ser centrifugados:

um. Separação de componentes sanguíneos
Extração de plasma e soro: O sangue é tipicamente centrifugado logo após a coleta para separar seus componentes. O plasma é separado após o sangue ser coletado em tubos com anticoagulantes, enquanto o soro é coletado após a coagulação (sem anticoagulantes). Se os tubos com sangue forem deixados em pé por muito tempo, pode ocorrer coagulação, levando a uma amostra imprecisa.

Quando a centrífuga: o sangue geralmente deve ser centrifugado dentro de 2 horas após a coleta. Os atrasos podem causar formação de coágulos e degradação de componentes celulares.

b. Separação celular e sobrenadante
Cultura e pesquisa de células: Ao trabalhar com células cultivadas, a centrifugação é necessária para separar as células do meio de cultura. Por exemplo, as células podem ser gritadas para colher proteínas, RNA ou DNA.

Quando a centrífuga: a centrifugação das culturas celulares é realizada quando a cultura atinge a confluência ou após a adição de substâncias (por exemplo, medicamentos ou estimulantes) às células. É fundamental para a centrifugia no momento apropriado para evitar estresse desnecessário nas células, o que pode comprometer sua viabilidade.

c. Esclarecimento de amostras
Em muitas análises biológicas e químicas, o material particulado deve ser removido de soluções para esclarecer amostras para análise.

Quando a centrífuga: normalmente, após a coleta de amostras ou se partículas (por exemplo, precipitadas, fragmentos de tecido) estão presentes em solução.

d. Purificação de moléculas biológicas
A centrifugação é uma etapa -chave na purificação de proteínas, ácidos nucleicos e outras moléculas biológicas. A ultracentrifugação pode separar partículas no nível subcelular ou molecular.

Quando a centrífuga: esta etapa deve ser feita imediatamente após a coleta de amostras ou após a precipitação de uma molécula de interesse.

3. Quanto tempo e em que velocidade os tubos devem ser centrifugados?
Depois de estabelecer que a centrifugação é necessária, a próxima pergunta é quanto tempo e em que velocidade você deve centrifugar a amostra. As condições corretas dependem do tipo de amostra e do que você está tentando se separar.

um. Velocidade (RPM ou RCF)
A velocidade é normalmente medida em revoluções por minuto (rpm) ou força centrífuga relativa (RCF). O RCF é mais preciso para determinar quanta força é aplicada a uma amostra.

A centrifugação de baixa velocidade (por exemplo, para separar o plasma sanguíneo) normalmente varia de 1.000 a 3.000 rpm (cerca de 1000 a 1500 x g).

A centrifugação de alta velocidade (por exemplo, para separar células ou organelas) pode variar de 5.000 a 20.000 rpm (cerca de 3000 a 10.000 x g).

A ultracentrifugação (para separar macromoléculas ou componentes subcelulares) pode atingir velocidades acima de 50.000 rpm (cerca de 100.000 x g).

b. Tempo
A duração da centrifugação pode variar, mas geralmente está na faixa de 5 a 20 minutos.

Amostras de sangue podem ser giradas por 10 a 15 minutos.

Peletamento de células ou precipitação de proteínas pode exigir 15 a 20 minutos a uma velocidade mais alta.

c. Temperatura
Em alguns casos, o controle de temperatura é fundamental para evitar a degradação da amostra. Por exemplo, as amostras de sangue e plasma geralmente são giradas a 4 ° C para reduzir o risco de hemólise ou degradação de proteínas.

A temperatura ambiente é fina para amostras menos sensíveis, como alguns produtos químicos ou pequenas partículas.

4 fatores a serem considerados antes da centrifugação

Vários fatores afetam o resultado da centrifugação e devem ser considerados para garantir que suas amostras sejam processadas corretamente.

um. Tipo de amostra
Amostras biológicas (por exemplo, sangue, células, tecido) têm diferentes densidades e propriedades físicas que soluções químicas ou partículas. Para amostras biológicas, a escolha do material correto do tubo e dos aditivos é crucial. Por exemplo, certos tubos contêm anticoagulantes para processamento de sangue e alguns podem resistir à temperatura e pressão da centrifugação de maior velocidade.

b. Tamanho do tubo centrífugo
O tamanho do tubo afeta a velocidade e a força ideais para a centrifugação. Volumes maiores podem exigir velocidades mais lentas para uma separação eficiente, enquanto volumes menores podem ser centrifugados em velocidades mais altas.

c. Amostra de viscosidade
Amostras altamente viscosas podem exigir um tempo de centrifugação mais longo ou uma velocidade mais lenta para evitar danos à amostra. Além disso, podem ser necessários tubos especializados com maior resistência às forças centrífugas.

d. Equilíbrio de centrífuga
É crucial que os tubos sejam equilibrados na centrífuga. Tubos com volume e tipo de conteúdo semelhantes devem ser colocados em frente um ao outro para evitar desequilíbrios que podem danificar a máquina e comprometer a qualidade da separação.

5. Melhores práticas para centrifugação

Centrífuga pré-chill para amostras sensíveis: para sangue, plasma e certas proteínas, o pré-arrepio da centrífuga a 4 ° C pode reduzir a degradação da amostra.

Evite os tubos de enchimento excessivo: os tubos devem ser preenchidos no volume recomendado (geralmente 75% completo) para evitar vazamentos ou separação ineficaz.

Não centrífuga demais: a centrifugação prolongada ou excessiva pode danificar partículas, células ou moléculas frágeis, siga os tempos e velocidades recomendados.

Misture as amostras suavemente antes da centrifugação: especialmente para amostras biológicas, verifique se elas são completamente misturadas antes da centrifugação para evitar sedimentação desigual.

6. Quando não para os tubos de centrifugação

Também existem cenários em que a centrifugação pode não ser apropriada:

Para tubos com amostras sensíveis ao calor: algumas amostras se degradam quando expostas a altas velocidades ou tempos de centrifugação prolongados. Nesses casos, métodos de separação alternativos devem ser considerados.

Quando as amostras precisam ser analisadas imediatamente: às vezes, a centrifugação pode alterar a composição de uma amostra; portanto, se for necessária uma análise imediata (por exemplo, para determinados testes), é importante pesar as compensações.

7. Conclusão

Tubos centrifugados No momento certo e nas condições corretas, é crucial para alcançar resultados precisos e confiáveis. Esteja você separando componentes sanguíneos, esclarecendo líquidos ou colhendo células e proteínas, entendendo quando, quanto tempo e em que velocidade para centrífuga é fundamental para o seu trabalho. Ao aderir às diretrizes e práticas recomendadas estabelecidas, você pode garantir que suas amostras sejam processadas de maneira eficaz e com perda mínima de integridade.